Réévaluation clinique du test QuantiFERON TB-G comme méthode diagnostique pour différencier la tuberculose active de la mycobactériose non tuberculeuse

Réévaluation clinique du test QuantiFERON TB-G comme méthode diagnostique pour différencier la tuberculose active de la mycobactériose non tuberculeuse

Introduction Nous avons réévalué l’utilité d’un test immuno-enzymatique couplé à l’enzyme interféron γ QuantiFERON TB-G [QFT-TB]; Cellestis dans l’obtention d’un diagnostic différentiel entre tuberculose active et mycobactériose non tuberculeuse NTMMéthodesLes sujets étaient des volontaires sains, des patients atteints de tuberculose active et des patients atteints de MNT qui satisfaisaient aux directives diagnostiques de l’American Thoracic Society d’avril à juin. -TB test a été réalisé pour tous les sujets Le test QFT-TB a été réalisé tous les moisRésultats Des volontaires sains,% ont eu un résultat négatif au TCT et% ont eu un résultat négatif au test QFT-TB Parmi les patients TB actifs,% ont eu un TST positif Résultats et% avaient un résultat négatif au test QFT-TB Parmi les patients atteints d’une maladie pulmonaire à Mycobacterium avium,% avaient un résultat positif et% avaient un résultat positif au test QFT-TB. Le test QFT-TB avait une sensibilité moyenne de% et Spécificité moyenne du% Les résultats du test QFT-TB pour les patients atteints de TB active ont temporairement diminué pendant le traitement impliquant des médicaments antituberculeux. Conclusions: Nous avons confirmé que le test QFT-TB est une méthode de diagnostic utile pour différencier la tuberculose pulmonaire active de la MNT, par rapport au TCT. Cependant, parce qu’il est possible que l’effet du test QFT-TB peut durer longtemps après le traitement et peut ne pas être résolu au fil du temps, même avec le traitement, car dans cette étude, il peut ne pas fournir un niveau de certitude concernant la guérison de l’infection

L’outil de diagnostic immunologique standard pour le diagnostic de tuberculose TB, le test cutané à la tuberculine TST, présente de nombreuses lacunes bien connues Deux visites médicales sont nécessaires pour compléter le test En outre, les PPV de la tuberculine contiennent de nombreux antigènes partagés avec d’autres Le TCT ne permet pas de distinguer de façon fiable la tuberculose résultant d’une immunisation antérieure avec le vaccin BCG Calmette-Guérin BCG ou de la plupart des mycobactéries non tuberculeuses. C’est un problème majeur au Japon, car une proportion croissante d’individus TB sont nés à l’étranger. La plupart de ces personnes ont reçu la vaccination par le BCG pendant l’enfance Un test plus immunologiquement précis et pratique pour le diagnostic de la tuberculose renforcerait considérablement les efforts de lutte antituberculeuse dans les pays en développement ayant un taux élevé de tuberculose. Les tests peuvent détecter les lymphocytes T qui produisent l’IFN-γ en réponse à la cible antigénique ESAT sécrétée précocement – et protéine de filtrat de culture CFP-, avec un ELISA utilisé pour mesurer les concentrations d’IFN-γ dans les surnageants QuantiFERON TB-G [QFT-TB]; Cellestis ou un essai immuno-enzymatique lié à une enzyme utilisé pour détecter des cellules T individuelles produisant de l’IFN-y T SPOT-TB; Oxford Immunotec La Food and Drug Administration des États-Unis a approuvé le test QFT-TB et évalue le test T SPOT-TB, dont l’utilisation a été approuvée en Europe. Ces tests révèlent un résultat positif pour la plupart des personnes ayant une probabilité élevée de TB et résultat négatif pour les personnes vaccinées par le BCG avec une faible probabilité de TB Parmi ces tests, le test QFT-TB a été utilisé pour la première fois commercialement au Japon en avril pour le diagnostic de la tuberculose. Par la suite, en décembre, les Centers for Disease Control and Prevention ont proposé des lignes directrices pour l’utilisation du test QFT-TB pour détecter l’infection tuberculeuse aux États-Unis . Par conséquent, nous avons réévalué la spécificité et la sensibilité de le test QFT-TB pour l’identification des patients atteints de tuberculose active et de volontaires sains sans tuberculose, dans une population majoritairement vaccinée par le BCG au Japon, selon les lignes directrices proposées par les Centers for Disea se Contrôle et Prévention

Sujets et méthodes

Population étudiée L’étude a été approuvée par le comité d’éthique de la Kawasaki Medical School Cinquante patients atteints de tuberculose active confirmés par une culture d’expectoration, de liquide de lavage bronchoalvéolaire ou de liquide pleural positif à la tuberculose, ainsi que de patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse. qui répondait aux critères diagnostiques de l’American Thoracic Society , ont été inclus prospectivement d’avril à juin. Cinquante ans Kawasaki Medical School étudiants ont participé à cette étude en tant que sujets sains de contrôle Les patients ont reçu leur diagnostic à Kawasaki Medical School Lits d’hôpital, Kawasaki Lits d’hôpitaux Kawasaki ou lits d’hôpital Asahigaoka Nous avons obtenu un consentement éclairé de tous les participants à cette étude. Des volontaires sains% des patients, des patients atteints de TB active% et des patients NTM% ont eu des résultats négatifs aux tests sérologiques pour le VIH. facteurs de risque évidents d’infection par le VIH Des volontaires sains, nous collectons d données démographiques concernant tout antécédent de tuberculose antérieure ou exposition à une personne atteinte de tuberculose, autres facteurs de risque de tuberculose, par exemple infection par le VIH, leucémie, lymphome, diabète sucré ou insuffisance rénale, et administration de médicaments immunosuppresseurs dans les mois précédant l’inscription au Les informations concernant les résultats antérieurs de Mantoux TST et BCG NTM, ainsi que des informations sur les symptômes cliniques et les résultats de laboratoire ont été recueillies au moment de l’enrôlement. Des expectorations ou d’autres échantillons respiratoires appropriés ont été prélevés chez tous les patients et des échantillons de culture ont été prélevés. Pour la collecte des échantillons de mycobactéries et TST Chaque sujet avait un échantillon de sang héparinisé recueilli par ponction veineuse pour le dosage de l’IFN-γ du sang total. Des échantillons sanguins ont été prélevés avant l’administration du TST de Mantoux pour le TST, mL de tuberculine PPD Nippon BCG; équivalent à des unités tuberculiniques de la solution de PPD a été injecté par voie intradermique dans la face palmaire de l’avant-bras, et le diamètre d’induration transversal a été mesuré plus tard.Le test QFT-TB a été réalisé selon les recommandations du fabricant Cellestis. test consistait en un témoin négatif un puits nul [c.-à-d. sang total sans antigène ou mitogène], un contrôle positif un puits mitogène [c.-à-d., sang total stimulé avec la photohémaggulutinine mitogène], et des puits d’échantillon stimulés avec ESAT- ou CFP- Des échantillons de sang total ont été incubés pendant une nuit à ° C dans une atmosphère humidifiée. Le niveau d’IFN-γ du puits nul a été considéré comme la valeur de fond et a été soustrait des valeurs pour le puits mitogène et les puits stimulés par antigène Le résultat du test a été considéré comme positif si le taux d’IFN-γ dans l’échantillon bien après la stimulation avec ESAT- et / ou CFP- était de ⩾ UI / mL après soustraction de la valeur pour l’échantillon neutre. l, quel que soit le résultat du puits témoin positif Le résultat du test a été considéré comme négatif si le niveau d’IFN-γ était & lt; UI / mL et si le taux d’IFN-γ du puits témoin positif après soustraction de la valeur pour le puits nul était de ⩾ UI / mL. Le résultat du test était considéré comme indéterminé si le taux d’IFN-γ était & lt; IU / mL dans les deux puits d’antigène et & lt; IU / mL dans le puits témoin positif Le test QFT-TB a été réalisé chez tous les patients avant l’instauration de l’administration de médicaments antituberculeux et a été réalisé à nouveau,, et des mois plus tard pendant le traitement de l’analyse TBS active. Les résultats du test IFN-γ du sang total ont été saisis dans le logiciel Excel Microsoft puis transférés au logiciel Santa, version Santa, pour analyse statistique. L’analyse a consisté en le test t de Student, pour évaluer les différences de moyennes sur la base de la transformation logarithmique de les mesures IFN-γ; le test χ, pour tester la différence de proportions; méthodes binomiales exactes, pour calculer les intervalles de confiance pour les proportions; et régression logistique du maximum de vraisemblance, pour estimer la force de l’association entre la durée du traitement antituberculeux et les résultats du test IFN-γ du sang total et du TST La sensibilité, la spécificité, la valeur prédictive positive et la valeur prédictive négative du test QFT-TB avec CFP- et ESAT- ont été calculés en comparant les individus avec TB active avec un groupe témoin de patients avec NTM

Résultats

Les sujets ont été inclus dans l’étude d’avril à juin. Cinquante étudiants de Kawasaki Medical School ont participé en tant que volontaires sains% de ces volontaires ont reçu la vaccination BCG L’âge moyen des volontaires sains était de plusieurs années, années Aucun de ces sujets n’avait d’histoire Des patients atteints de tuberculose active présentaient une tuberculose pulmonaire, un tuberculome pulmonaire, une pleurite tuberculeuse, une tuberculose pulmonaire et une pleurésie tuberculeuse, avaient des antécédents de tuberculose pulmonaire, de tuberculose pulmonaire et de pleurésie tuberculeuse. lymphangite tuberculeuse cervicale, et avait une péritonite tuberculeuse Résultats des frottis acido-résistants pour les expectorations, les liquides de lavage broncho-alvéolaire ou les échantillons de liquide pleural étaient positifs chez les patients tuberculeux positifs à la culture, par ex. tuberculose active plaies. résultats positifs pour la tuberculose Un total de patients, hommes et femmes, Selon les critères diagnostiques de l’American Thoracic Society, le micro-organisme causal était Mycobacterium avium chez les patients, Mycobacterium intracellulare chez Mycobacterium kansasii in, et Mycobacterium marinum Chez les patients atteints de NTM pulmonaire, l’âge moyen était de différence dans la répartition par sexe entre les patients atteints de tuberculose active et les patients avec une table NTM

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients atteints de tuberculose active TB et patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse pulmonaire NTMTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients atteints de tuberculose active TB et patients atteints de tuberculose non mycobactérienne mycobactériose NTMTrois-sept sujets% ont déclaré avoir été vaccinés par le BCG au moins une fois au moment de l’obtention du diplôme Le résultat du TCT était positif pour le pourcentage de volontaires sains, et tous avaient été vaccinés avec le BCG. Cependant, aucun volontaire en bonne santé n’a eu de résultat positif au test QFT-TB. Quatre-vingt quatorze pour cent des volontaires ont eu des résultats négatifs. % d’entre eux avaient un tableau de résultats indéterminé

Comparaison des résultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB et du test cutané tuberculinique TST pour volontaires sainsTable View largeTéléchargement Comparaison entre les résultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB et le test cutané tuberculinique TST pour volontaires sainsLe TST le résultat était positif pour% mais négatif pour% des patients avec TB active Les patients avec TB active avaient un taux de résultats positifs du test QFT-TB% significativement supérieur à celui du TST% P & lt; Vingt-cinq pour cent des patients qui avaient un frottis positif avaient des résultats positifs à la TBT Dix-huit pour cent des patients ayant un frottis négatif et une culture positive présentaient des résultats TB avant les résultats de la culture Ces résultats étaient négatifs pour les patients% et indéterminés pour les patients% Le taux de résultats faux négatifs du test QFT-TB était également significativement inférieur à celui du TST% P & lt; Deux patients qui avaient un résultat faux-négatif QFT-TB et des patients qui avaient un résultat TB indéterminé TBT étaient des hôtes immunodéprimés qui avaient une maladie sous-jacente sévère, et une lymphopénie sévère a été reconnue dans le sang périphérique de ces patients. résultats des tests sérologiques pour le VIH Deux patients ont été considérés comme ayant des résultats négatifs parce que le contrôle positif du test QFT-TB était & gt; UI / mL pour l’ESAT ou le CFP – un était UI / mL pour ESAT -, et l’autre était UI / mL pour ESAT – Les résultats ont été considérés comme indéterminés pour les patients parce que le contrôle positif pour le test QFT-TB était & lt ; IU / mL pour l’ESAT et le CFP- Seul le patient était immunocompétent et avait des résultats positifs au TCT, et il avait également des résultats négatifs des tests sérologiques pour le VIH. Pour ce patient, un diagnostic de tuberculome pulmonaire a été fait par bronchoscopie.

Comparaison entre les résultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB et du test cutané tuberculinique TST pour les patients atteints de tuberculose activeTable View largeTéléchargement Comparaison entre les résultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB et le test cutané tuberculinique TST pour les patients avec tuberculose active

Tableau View largeTélécharger la diapositive Résultats cliniques pour les patients atteints de tuberculose TB présentant des résultats de tests QuantiFERON TB-G QFT-TB faussement négatifs ou indéterminésTable View largeTélécharger les résultats cliniques pour les patients atteints de tuberculose TB ayant eu un test QuantiFERON TB-G QFT-TB faussement négatif ou indéterminé RésultatsComme pour la spécificité, la sensibilité, la valeur prédictive positive et la valeur prédictive négative de la CFP et de l’ESAT pour le diagnostic de TB active, en utilisant la valeur seuil IU / mL, les spécificités moyennes avec les IC% de CFP et ESAT- étaient%% -% et%% -%, respectivement; les sensibilités moyennes étaient de%% -% et%% -%, respectivement; les valeurs prédictives positives moyennes étaient respectivement de%% -% et%% -%; et les valeurs prédictives négatives moyennes étaient%% -% et%% -%, respectivement. Si les données de CFP- et ESAT- étaient combinées et qu’une personne était positive pour au moins des antigènes, on a jugé qu’elle avait un résultat de test positif; la sensibilité moyenne était% IC%,% -%, la spécificité moyenne était%% CI,% -%, la valeur prédictive positive moyenne était%% CI,% -%, et la valeur prédictive négative moyenne était%% CI,% -% Le taux de résultats positifs, selon le micro-organisme pathogène détecté, était de% pour M avium,% pour M intracellulare,% pour M kansasii, et% pour M marinum table Le taux de résultats positifs associés au TST% était significativement plus élevé que celle associée au test QFT-TB% pour les patients atteints de MAC maladie du complexe M avium pulmonaire, et la plupart de ces patients avaient reçu le tableau de vaccination BCG Cinq des patients ayant des résultats positifs TB-TB avaient des antécédents de TB pulmonaire cicatrisée le traitement était inconnu, les patients avaient reçu un traitement contre la tuberculose pulmonaire Deux d’entre eux avaient reçu un traitement antituberculeux en l’espace de quelques années, avaient reçu un traitement antituberculeux après quelques années et le reste avait reçu un traitement antituberculeux en quelques années.

Table View largeDownload slideRésultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB réalisé chez des patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse NTMTable View largeTélécharger les résultats du test QuantiFERON TB-G QFT-TB réalisé chez des patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse NTM

Tableau View largeTélécharger la lameComparaison de QuantiFERON TB-G Résultats de TCT QFT-TB et tuberculiniques chez des patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse Mycobacterium avium complex diseaseTable View largeTélécharger une diapositive Comparaison de QuantiFERON TB-G Tests tuberculiniques QFT-TB et tuberculiniques chez des patients atteints de mycobactériose non tuberculeuse Mycobacterium Enfin, en examinant les changements transitoires dans les résultats du test QFT-TB pour les patients atteints de tuberculose active après le début du traitement impliquant des médicaments antituberculeux, le taux de résultats positifs de tuberculose QFT a d’abord légèrement augmenté puis diminué progressivement, avec un taux de % observé avant le traitement,% mois après,% mois après,% mois plus tard,% mois plus tard et% mois plus tard tableau Concernant l’évolution clinique de la maladie chez les patients tuberculeux ayant terminé le traitement et chez qui le test QFT-TB a été réalisé Au cours d’une période de quatre mois, tous les patients ont eu une bonne réponse au traitement par antitube. médicaments ridicules Malgré les bons effets cliniques observés, les patients ont quand même eu un résultat positif au test QFT-TB.

Tableau View largeTéléchargement de diapositive Changement transitoire des résultats des tests QuantiFERON TB-G QFT-TB pour les patients atteints de tuberculose active recevant un traitement antituberculeuxTable Voir grandDownload slideTransition de QuantiFERON TB-G Tests QFT-TB pour les patients atteints de tuberculose active recevant un traitement antituberculeux

Discussion

test après exposition à des mycobactéries non tuberculeuses Compte tenu de la spécificité signalée des ESAT et CFP pour les espèces mycobactériennes, le test risque d’être négatif pour l’infection par MAC, qui est une source majeure d’infection par des mycobactéries non tuberculeuses. avec la conclusion de notre étude que la réponse IFN-γ à la fois pour l’ESAT et la CFP était négative chez tous les patients négatifs pour Mycobacterium tuberculosis et positifs pour MAC, sauf chez les patients Cinq des patients avec MAC qui avaient un IFN-γ positif la réponse pourrait avoir une co-infection avec la TB D’autre part, des réactions positives peuvent être attendues chez les patients avec une infection à M kansasii ou M marinum, car les gènes codant à la fois l’ESAT et la CFP sont présents dans ces mycobactéries non tuberculeuses. tous les patients avec NTM en raison de M kansasii chez les patients et M marinum en ont eu des résultats positifs à la fois pour ESAT et CFP-Nous avons étudié la raison pour laquelle il y avait indéterminé QFT-TB te st résultats pour les patients atteints de tuberculose active et de résultats de tests faussement négatifs pour la tuberculose QFT chez les patients atteints de tuberculose active Quatre des patients avec des résultats indéterminés de TB-QFT présentaient une numération lymphocytaire lymphocytaire modérée, & lt; En réalité, ce test QFT-TB dépend de l’élaboration de cytokines inflammatoires par des lymphocytes T préalablement sensibilisés aux antigènes spécifiques de la tuberculose. Dans le sang, les cellules mononucléaires du sang périphérique sont stimulées in vitro, et le la production d’IFN-γ à partir de lymphocytes T sensibilisés est mesurée par ELISA Par conséquent, nous avons pensé que la lymphocytopénie provoquait à la fois la diminution de la production d’IFN-γ et la diminution des niveaux mitochondriaux QFT-TB & lt; IU / mL Cependant, bien que la numération lymphocytaire ait été atteinte dans les limites normales, le résultat du test QFT-TB indéterminé était le résultat de la petite taille de la lésion, de la localisation ou de l’absence de lésion de la cavité. le fait que les patients qui avaient des résultats faussement négatifs avaient une lymphocytopénie sévère, ces patients présentaient des taux mitogènes QFT-TB de & gt; IU / mL Par conséquent, nous avons dû considérer que le résultat du test QFT-TB était négatif selon les directives du Centre de contrôle et de prévention des maladies Nous pensons qu’il est difficile d’évaluer le test QFT-TB à travers les résultats de cette étude. Les résultats des tests sérologiques pour le VIH ont été négatifs chez les patients avec des résultats indéterminés et des résultats faussement négatifs pour la TBT. Nous avons également étudié les changements transitoires des résultats du test QFT-TB dès le début du traitement antituberculeux chez les patients Par la suite, bien que le taux de résultats positifs pour l’ESAT et / ou la PCP ait légèrement augmenté, il a diminué de% avant le traitement à% mois plus tard, et les taux moyens d’IFN-γ ont également diminué. Le traitement antituberculeux était cliniquement efficace chez tous les patients avec une diminution des niveaux d’IFN-γ Nous pensons que cela peut être dû au retard de la mort de M tuberculosis à la diminution de la production d’IFN-γ due aux lymphocytes T orts, bien que le dosage immuno-enzymatique ait été mentionné comme étant utile dans la surveillance de la chimiothérapie antituberculeuse pour la TB active , il n’y a eu aucun rapport concernant les changements transitoires dans le test QFT-TB. peut être utile comme marqueur d’une thérapie antituberculeuse réussie Cependant, bien que tous les patients atteints de tuberculose active qui ont terminé le traitement et subi un test périodique de QFT-TB en quelques mois aient eu une bonne réponse au traitement, les patients ont continué à subir un test positif. Résultat Comme les effets du test QFT-TB peuvent durer longtemps après le traitement et ne peuvent être résolus avec le temps, même avec le traitement, comme dans cette étude, un long suivi des changements transitoires dans les résultats du test QFT-TB doit être effectué Au cours de la même année, des patients ayant une maladie pulmonaire à MAC, des patients ayant des antécédents de tuberculose pulmonaire cicatrisée ont eu des résultats positifs pour la tuberculose QFT parce que ces résultats positifs peuvent aussi indiquer que Les résultats du test QFT-TB peuvent durer longtemps après la fin du traitement et peuvent ne pas se résoudre avec le temps, même avec un traitement, le test QFT-TB peut ne fournir aucun niveau de certitude concernant la guérison de l’infection. du test QFT-TB comme méthode de diagnostic immunologique pour la détection de la tuberculose, sur la base de son excellente spécificité et sensibilité. Cependant, plusieurs résultats de tests QFT-TB faussement négatifs ou indéterminés ont été rencontrés chez des patients atteints de tuberculose active Maladie sous-jacente avec lymphocytopénie Bien que le test QFT-TB puisse être utile comme marqueur pour contrôler l’efficacité clinique, il peut ne fournir aucun niveau de certitude concernant la guérison de l’infection, car il est possible que les réponses aux effets de cette méthode soient longues. durable et peut ne pas se résoudre au fil du temps, même avec un traitement, comme dans cette étude

Remerciements

Nous remercions l’hôpital T Matsushima Asahigaoka, Okayama City, Japon et l’école de médecine N Okimoto Kawasaki, l’hôpital Kawasaki, Kurashiki, Japon pour leurs commentaires utiles Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: no conflicts

Sylvie

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