Diagnostic de la neurocysticercose par détection de l’ADN de Taenia solium à l’aide d’une plateforme de criblage d’ADN globale

Diagnostic de la neurocysticercose par détection de l’ADN de Taenia solium à l’aide d’une plateforme de criblage d’ADN globale

Cysticercose est causée par Taenia infection solium du diagnostic du cerveau est le plus souvent par la visualisation du scolex parasite par imagerie par résonance magnétique du cerveau ou par les résultats de neuroimagerie caractéristiques avec les résultats des tests sérologiques positifs pour T solium Un patient qui présente une lésion cérébrale solitaire pose généralement un dilemme de diagnostic, car le diagnostic différentiel comprend souvent neurocysticercose et d’autres infections ou néoplasme Bien que la sensibilité des tests sérologiques T solium approche% chez les patients ayant de multiples kystes intraparenchymateux, la sensibilité des tests pour les patients avec des kystes solitaires est & lt;%, ce qui rend les tests sérologiques un outil de diagnostic moins utile pour les patients présentant des lésions du système nerveux central solitaire du système nerveux central Nous décrirons les patients avec des lésions du système nerveux central solitaires qui ont reçu un diagnostic de neurocysticercose après l’identification de l’ADN T solium dans les tissus de biopsie du cerveau avec l’utilisation d’une plate-forme mondiale de dépistage de l’ADN de dépistage mondial est un pro outil d’erreur pour le diagnostic de l’infection du SNC, en particulier lorsque les outils de diagnostic traditionnels sont insensibles

Neurocysticercose NCC est la cause la plus fréquente d’épilepsie acquise dans le monde et survient lorsque la forme larvaire du ténia Taenia solium forme des kystes encapsulés dans le SNC Les manifestations neuro-visqueuses de la NCC varient selon la région géographique Amérique latine, Afrique et Asie, NCC est généralement associée à de multiples kystes, alors qu’en Inde, NCC est généralement associée à un kyste dégénératif solitaire Les critères absolus de diagnostic de NCC comprennent la démonstration histologique de T solium dans le cerveau ou la moelle épinière, démonstration de T solium scolex dans un Lésion kystique par TDM ou IRM, ou visualisation fundoscopique des parasites sous-rétiniens Un diagnostic définitif de CCN peut également être posé chez des personnes présentant des signes caractéristiques de neuro-imagerie, des symptômes cliniques, des résultats sérologiques positifs au solium T ou une exposition à une personne ou une zone où l’infection au T solium est endémique Dans la pratique clinique, une lésion solitaire du SNC présente un dilemme diagnostique et Les tests sérologiques pour le solium T ont des résultats positifs chez% -% des patients avec des lésions solitaires, et des résultats faussement positifs se produisent chez les individus avec d’autres infections parasitaires [,,] Approches moléculaires ciblant les séquences génétiques des espèces de Taenia ont été utilisés pour détecter la présence de CNC dans le LCR et d’autres tissus et pour le génotypage géographique; Cependant, ces tests nécessitent généralement une suspicion a priori d’infection au T solium Des plateformes de criblage d’ADN globales utilisant un ARN ribosomique Le séquençage du gène rARN peut détecter une large gamme d’ADN bactérien ou fongique et, en même temps, les différencier des régions conservées Le gène s rRNA est une cible standard utilisée pour l’identification des espèces bactériennes, tandis que les régions ITS espacées transcrites internes et le gène s rRNA sont des cibles pour l’identification des espèces fongiques Bien que la région ITS puisse dépister les parasites Nous rapportons des patients présentant des lésions du système nerveux central (SSC) uniques qui ont détecté du soluté T dans leurs échantillons de tissu cérébral par séquençage du gène de l’ARNr dans un dépistage global. Plate-forme; la présence de T solium a ensuite été confirmée dans une analyse secondaire utilisant des amorces spécifiques à l’espèce Taenia. Un homme âgé de 17 ans présentant des convulsions qui impliquaient son bras gauche et sa jambe gauche a présenté une lésion polykystique unique dans le lobe pariétal supérieur droit, avec Le patient n’avait pas d’autres déficits neurologiques, maux de tête, frissons, sueurs nocturnes ou perte de poids. Il a signalé une température de ° C avant le début des crises et a également rapporté une toux qui s’était résolue plusieurs jours avant la présentation. Il avait voyagé à travers l’Inde mais ne connaissait pas les contacts potentiels avec la tuberculose Un test PPD effectué en Inde était non réactif. Tests sérologiques pour le solium T, types de VIH et, virus de l’hépatite B avaient des résultats négatifs. de la poitrine, de l’abdomen et du bassin avaient des résultats normaux Le patient a initié une thérapie avec un anticonvulsivant et un cours d’une journée L’IRM, obtenue des mois après le début du traitement, a montré une diminution de l’œdème mais pas de modification de la taille de la lésion. Des tests sérologiques supplémentaires pour le sérum T dans les échantillons de sérum et de liquide céphalo-rachidien ont donné des résultats négatifs. le profil était normal, et les cultures pour les bactéries, les mycobactéries et les champignons ne présentaient pas de croissance. En raison de l’inquiétude concernant la tuberculose, le patient a choisi de subir une résection chirurgicale de la lésion; L’examen histopathologique a révélé un infiltrat inflammatoire lymphoplasmocytaire sans évidence de parasite ou de mycobactérie. Figure Cultures et analyse ADN des échantillons de tissus cérébraux pour les bactéries, mycobactéries et champignons ont eu des résultats négatifs, mais des amorces universelles ciblant la région ITS ont détecté l’ADN de solium. mitochondrial cytochrome c oxydase sous-unité cox gène spécifique pour les espèces de Taenia identifiées T solium IRM additionnelle réalisée plusieurs mois après l’intervention chirurgicale n’a révélé aucune récidive de la lésion, et le patient est resté libre de crises

Vue de la figure grandDownload, une IRM du cerveau révélant une large zone d’œdème vasogénique dans le lobe pariétal droit sur l’imagerie d’inversion-récupération fluid-atténuée B, IRM après l’administration de gadolinium, révélant une seule amélioration de la flèche arrowFigure cerveau révélant une large zone d’œdème vasogénique dans le lobe pariétal droit à l’imagerie d’inversion-récupération à atténuation de fluide B, IRM après administration de gadolinium, révélant une seule flèche de lésion augmentante

Vue de la figure grandDownload slideA, Histopathology sections révélant dense tissu éosinophile fibreux avec infiltrat inflammatoire mixte de cellules plasmatiques, les lymphocytes et occasionnellement neutrophiles colorant hématoxyline et éosine; agrandissement original, × B, coupes d’histopathologie sous immersion d’huile à haute puissance ne révélant pas de protoscolex hématoxyline et de coloration à l’éosine parasite; grossissement original, ×; taches colorées pour les organismes acido-résistants Ziehl Nielson coloration et les champignons Gomori méthénamine colorant argent ont des résultats négatifsFigure Vue largeTélécharger diapositiveA, histopathologie sections révélant tissu fibreux éosinophile dense avec infiltrat inflammatoire mixte de cellules plasmatiques, les lymphocytes et occasionnels neutrophiles colorant hématoxyline et éosine; agrandissement original, × B, coupes d’histopathologie sous immersion d’huile à haute puissance ne révélant pas de protoscolex hématoxyline et de coloration à l’éosine parasite; grossissement original, ×; Taches pour les organismes acido-résistants Ziehl Nielson tache et champignons Gomori methenamine silver tache a des résultats négatifsCas rapport Un homme mexicain âgé de 7 ans présentant une incoordination de sa main gauche et une crise généralisée tonico-clonique IRM a révélé une seule lésion augmentante dans le pariétal droit lobe, avec œdème vasogénique environnant Le patient a initié un traitement par dexaméthasone mais n’a reçu ni antihelminthiques ni antibiotiques. Les résultats des examens généraux et neurologiques détaillés étaient normaux. Le patient a nié tout contact connu avec la tuberculose. Un test PPD a donné des résultats négatifs. Les tests sérologiques des échantillons de sang et de liquide céphalorachidien ont révélé des résultats négatifs pour le solium T, le VIH, le cytomégalovirus, le virus Epstein-Barr, Toxoplasma gondii, Cryptococcus neoformans, Echinococcus granulosus, Brucella, Bartonella, Mycobacterium tuberculosis et Treponema pallidum. le patient est resté cliniquement stable pendant un -m une autre IRM et une imagerie de perfusion cérébrale n’ont révélé aucun changement; la lésion du SNC a été considérée comme représentant un processus infectieux granulomateux. La thérapie aux stéroïdes a été réduite, et l’IRM subséquente a démontré une augmentation de la taille de la lésion.

Figure Voir largeDownload slideA, IRM du cerveau révélant une grande surface d’un œdème vasogène dans le lobe pariétal droit sur l’imagerie inversion-récupération atténué fluide B, sagittale IRM après l’administration de gadolinium, révélant une seule lésion Amélioration arrowFigure Voir largeDownload slideA, IRM le cerveau révélant une grande surface d’un œdème vasogène dans le lobe pariétal droit sur l’imagerie inversion-récupération atténué fluide B, sagittale IRM après l’administration de gadolinium, révélant une seule lésion renforcement de arrowFive mois après la présentation, le patient a subi une ablation chirurgicale de la lésion brute l’examen macroscopique a révélé de petites poches kystique avec une vaste inflammation purulente, conformément à un abcès intraparenchymateux coloration hématoxyline-éosine fait preuve d’un infiltrat cellulaire inflammatoire mixte entrecoupée de bandes de figure collagène examen des multiples niveaux de la lésion n’a pas révélé cysticerques Culture et l’analyse de l’ADN pour les bactéries, mycobactéries, et champignons ont eu des résultats négatifs, mais l’ADN de T solium a été détecté par les analyses de séquence ITS et de région ITS. Une IRM supplémentaire réalisée quelques semaines après la résection n’a révélé que des modifications postchirurgicales, et un examen neurologique, effectué plusieurs mois après la résection, avait des résultats normaux.

Trate constitué de neutrophiles, de plasmocytes, de lymphocytes et d’histiocytes entrecoupés de bandes de collagène et associé à un parenchyme cérébral, caractérisé par une astrocytose dense réactive et une prolifération endothéliale étendue. Aucun organisme bactérien, fongique ou mycobactérien n’a été identifié. immersion dans l’huile de puissance ne révélant aucun protoscolex parasite; Diagnostic moléculaire Diagnostic moléculaire Le tissu cérébral a été digéré à l’aide de la protéinase K et l’ADN a été extrait à l’aide d’un kit QIAamp DNA Mini. L’ADN a été amplifié par PCR en utilisant des amorces spécifiques à l’ITS. et les régions ITS et la sous-unité ribosomale eucaryote s et ont été visualisées en utilisant des gels% d’agarose. Pour la région ITS, les amorces ITS ‘-TCCGTAGGTGAACCTGCG-‘ et ITS ‘-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-‘ ont été utilisées; pour la région ITS, les amorces ITS ‘-GCATCGATGAAGAACGCAGC-‘ et ITS ‘-TCCTCCGCTTATTGATATGC-‘ ont été utilisées; et pour s, les amorces NL ‘-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-‘ et NL ‘-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-‘ ont été utilisées. L’amplification PCR a été réalisée avec dénaturation initiale à ° C pendant min, cycles de dénaturation à ° C pendant min, recuit à ° C pendant min, extension à ° C pour min, extension finale à ° C pour min et maintien à ° C Toutes les autres paires d’amorces, y compris les amorces pour les premières paires de bases du gène ARNr S, la protéine de choc thermique et la sous-unité β polymérase ARN, Les échantillons ont été préparés pour le séquençage à l’aide du kit de séquençage ABI PRISM BigDye Terminator Cycle, et le séquençage de l’ADN a été effectué sur l’ABI PRISM Analyzer Applied Biosystems séquences monocaténaires dérivées de l’avant et l’inverse les amorces ont été assemblées en un contig double brin en utilisant Sequencher Gene Codes Corporation et ont été soumises à la base de données GenBank BLAST pour des correspondances de séquence secondaire. s étaient génétiquement apparentés aux paires de bases T solium évaluées, avec% de similarité de séquence pour le cas; L’analyse des produits de la région s et de la région ITS a donné des séquences non analysables. L’ADN modèle extrait a été réamplifié en utilisant des amorces se liant au gène mitochondrial cox de l’espèce Taenia, comme décrit ailleurs: JB ‘-TTTTTTGGGCATCCTGAGGTTTAT-‘ et JB ‘-AAAGAAAGAACATAATGAAAATG-‘ Les échantillons ont été préparés et séquencés comme décrit. L’identification des séquences du contig du gène cox a montré que les deux isolats étaient génétiquement identifiés comme T solium% et% séquence similarité pour le cas et le cas, respectivement. notre connaissance, la première utilisation d’une plate-forme globale de dépistage pour détecter l’infection T solium chez les patients avec des lésions solitaires du SNC Chez les deux patients, le diagnostic différentiel était large et inclus NCC, la tuberculose et le néoplasme examen histologique des niveaux multiples de chaque lésion, les cultures, l’examen cytologique et l’analyse sérologique du solium T ont donné des résultats négatifs. Le diagnostic éfinitif de NCC a été fait par la détection de l’ADN de T solium Il est plausible que les cysticerques n’aient pas été identifiés par un examen histopathologique en raison des dommages importants causés par l’albendazole, la dexaméthasone ou la réponse inflammatoire; Si oui, la plate-forme mondiale de dépistage peut être un outil encore plus utile pour les patients chez qui l’examen histopathologique ne détecte pas cysticerci. L’analyse des ITS ribosomaux et des régions ITS a été utilisée pour le génotypage géographique et la phylogénie moléculaire des espèces Taenia. Les régions codantes flanquant les régions ITS sont hautement conservées, ce qui permet la reconnaissance des amorces Le taux d’évolution des régions ITS est plus lent que celui des autres régions codant pour l’ARNr. régions génétiques, permettant la différenciation entre espèces parasitaires ADN mitochondrial ADNmt est multicopié, relativement petit, paires de bases, et possède un haut degré de variabilité en raison d’une évolution plus rapide Plusieurs séquences d’ADNmt, comme cox, sont d’excellentes cibles pour la différenciation interspécifique pour les deux helminthes et filaria La plate-forme de criblage globale intègre séquençage du gène rRNA Nous avons confirmé l’identification de l’ADN de T solium en utilisant des amorces ciblant les régions et les ITS pour identifier l’ADN fongique, s pour l’identification de l’ADN bactérien et rpoB, et hsp pour la détection de l’ADN mycobactérien. par une cible ADNmt spécifique, cox Global screening est un outil de diagnostic précieux et efficace pour les cliniciens qui permet l’identification d’une gamme variée d’organismes infectieux suspectés ou insoupçonnés Cette technologie est utilisée plus fréquemment, la sensibilité et la spécificité de ces tests pour identifier les pathogènes infectieux des échantillons de tissus humains seront mieux définis

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits

Sylvie

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