Développement De L’uvéite De Récupération Immunitaire De CMV De Cytomegalovirus Est Associée à L’épuisement Des Cellules Th Et De Mauvaises Réponses De Cellules T Spécifiques De CMV Systémique

Développement De L’uvéite De Récupération Immunitaire De CMV De Cytomegalovirus Est Associée à L’épuisement Des Cellules Th Et De Mauvaises Réponses De Cellules T Spécifiques De CMV Systémique

Contexte Les syndromes inflammatoires de reconstitution immunitaire IRIS sont un ensemble de pathologies inflammatoires associées à des infections opportunistes survenant chez ~% des patients infectés par le VIH de type immunodéficience humaine traités par antirétroviraux. Il a été proposé que ces affections soient liées par un système immunitaire dérégulé. sujettes à des réponses exagérées Cependant, les études immunologiques ont été limitées par la disponibilité d’échantillons longitudinaux de patients atteints d’IRIS et de sujets témoins correspondants appropriés cytomegalovirus CMV immunité de récupération uvéite IRU est un IRIS survenant chez jusqu’à% des patients atteints de rétinite CMV Bien que les réponses immunitaires pathologiques Nous avons examiné les réponses des lymphocytes T spécifiques au CMV, la fonction régulatrice des cellules T Treg et les réponses des cellules T polyclonales, y compris la production d’IL chez les patients. L’IRU du CMV et les sujets témoins immunorestaurés atteints de rétinite à CMV n’ont pas développé de IRUResultats Les patients avec CMV IRU ont présenté de faibles réponses de lymphocytes T CD spécifiques au CMV, comparativement aux sujets témoins, tandis que les réponses des lymphocytes T CD étaient comparables. Le nombre de cellules Th circulantes La déficience des réponses anti-CMV n’était pas associée à des différences dans la fonction des cellules TregConclusions Le compartiment des cellules Treg est intact chez les patients atteints d’IRV du CMV, et ces patients ne développent pas de réponses immunitaires systématiques CMV ou polyclonaux exagérées. caractérisé par une déplétion plus profonde des cellules Th et de mauvaises réponses immunitaires antivirales. L’IRU du CMV peut être plus susceptible de se développer chez les personnes présentant le plus haut degré de dysfonctionnement immunitaire avant l’initiation d’une thérapie antirétrovirale hautement active.

Un sous-ensemble de patients immunodéprimés avec un traitement antirétroviral hautement actif HAART développent des états inflammatoires connus sous le nom de syndromes inflammatoires de reconstitution immunitaire IRIS Les patients les plus susceptibles d’être affectés sont ceux qui commencent un TARV avec un faible nombre de CD et des infections opportunistes préexistantes [ ,] Les symptômes d’IRIS sont souvent localisés aux sites de l’infection antérieure , et IRIS chez les patients ayant des antécédents de rétinite à cytomégalovirus CMVR peut se manifester comme une inflammation de la voie uvéale postérieure de l’œil Ces faits ont conduit à Plus récemment, la compréhension de l’importance des cellules régulatrices Treg dans le contrôle des réponses immunitaires aux auto-antigènes a suggéré que l’absence de reconstitution des cellules Treg pourrait prédisposer à IRIS . Nous avons émis l’hypothèse que les lymphocytes T cytotoxiques spécifiques du CMV sont hyperactifs chez les patients CMV IRU en raison d’une déficience dans le nombre ou la fonction des cellules Treg et que des preuves de cette perturbation immunitaire, provoquées par le processus de restauration immunitaire, seraient observées dans les lymphocytes T circulants Pour tester cette hypothèse, nous avons étudié le contrôle cellulaire Treg sur les cellules mononucléées du sang périphérique PBMC provenant de patients atteints de CMVR dans une étude observationnelle multicentrique qui a développé ou non l’IRU

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Participants

Les participants ont donné leur consentement éclairé. Les directives et les normes du Département américain de la Santé et des Services Humains et de l’Université de Californie à San Francisco ont été suivies. Le comité d’examen institutionnel de l’Université de Californie à San Francisco a approuvé l’étude. la Déclaration d’Helsinki révisée chez les patients étaient des personnes immunorestaurées ayant des antécédents documentés de CMVR inscrits dans l’étude longitudinale des complications oculaires du SIDA LSOCA et ayant un spécimen PMBC disponible à un moment où une uvéite active a été diagnostiquée par un ophtalmologiste d’étude basé sur L’IRIS a montré que l’IRU a été diagnostiquée pour la première fois, si des PBMC étaient disponibles, ou la prochaine visite suivante lorsque les PMBC étaient disponibles. preuve de l’IRU préalable, par exemple, l’œdème maculaire, l’indice visite chos Pour les patients avec un cas nouvellement diagnostiqué de CMV IRU, une visite pré-index a été définie comme la visite d’étude se produisant des mois avant la visite de l’index. Dans toutes les visites pré-index L’examen ophtalmologique concomitant n’a révélé aucun signe d’uvéite active ou d’œdème maculaire d’uvéite antérieure. Des sujets témoins ont été choisis parmi les participants ayant des antécédents documentés de CMVR qui n’ont jamais reçu de diagnostic d’IRU, ont été immunisés par HAART et avaient des spécimens de PBMC disponibles dans le dépôt LSOCA de la même visite que le patient ± visite Pour chaque patient, les sujets témoins ont été sélectionnés, appariés aux patients par le nombre absolu de lymphocytes T CD au moment de la visite d’index, l’intervalle de temps depuis le diagnostic CMVR et la durée du suivi LSOCA

Échantillons

Des PBMC cryoconservées ont été obtenues à partir du dépôt LSOCA Thermo Electron, Rockville, MD. Des échantillons avec une% de viabilité ou un taux de récupération de & lt;% ont été jetés.

Analyse phénotypique

La fréquence des cellules Treg a été déterminée par un test de flux phénotypique précédemment décrit Le nombre absolu de cellules Treg a été calculé en multipliant la fréquence parmi les lymphocytes T CD par le nombre de cellules CD absolues déterminé dans le protocole LSOCA FoxP est un facteur de transcription exprimé par les cellules Treg naturelles et requis pour leur développement

Cytokine Flow Cytometry CFC

La fraction de cellules T CD et CD sensibles au CMV pp ou IE- a été déterminée par CFC, comme décrit ailleurs CDa est un marqueur mobilisé à la surface cellulaire sur la dégranulation des cellules T

Tests fonctionnels Treg

Chaque fois que disponible, des échantillons de PBMC des visites LSOCA suivantes après la visite d’index pour chaque patient et sujet témoin ont été utilisés dans des expériences de tri pour tester la fonction des cellules Treg dans la suppression de la prolifération par d’autres cellules T contre CD, CD, CD chaîne alpha du récepteur IL, exprimée par les cellules Treg , et chaîne alpha du récepteur CD IL, non présente sur les cellules Treg Les cellules CDCDCDCDlow ont été séparées des autres cellules avec un trieur FACS ARIA Aliquotes Les cellules Treg purifiées par tri ont été rajoutées à des cellules appauvries en Treg pour déterminer si les cellules Treg étaient mesurées dans des puits de microtitration. nos tests phénotypiques ont supprimé la prolifération et étaient fonctionnels. Les cellules ont été marquées avec du diacétate de succinimidyle carboxyfluorescéine puis stimulées avec CMV pp / I E peptides ou anticorps anti-CD liés à la surface pendant plusieurs jours

Analyses statistiques

Le traçage et l’analyse statistique ont été effectués en utilisant Stata / IC, version Stata. Une régression logistique conditionnelle a été utilisée pour tester les différences entre l’IRU du CMV et les groupes témoins qui nécessitaient un appariement cas-témoins.

RÉSULTATS

Caractéristiques du patient

Vingt-cinq participants au LSOCA répondaient aux critères de cas, parmi lesquels le CMV IRU nouvellement diagnostiqué avait tous un échantillon de PBMC disponible lors de la visite au moment du diagnostic initial. La visite d’index était une récurrence active d’uvéite pour les autres patients. Tableau L’intervalle médian entre le diagnostic du CMVR et le diagnostic du CMV IRU, c’est-à-dire, la visite de l’index était de plusieurs mois, mois pour les personnes nouvellement diagnostiquées avec le CMV IRU. l’intervalle médian entre le diagnostic CMVR et la visite d’index pour les uvéites récurrentes était de mois, mois L’intervalle entre le diagnostic CMVR et la visite d’index pour les sujets témoins était dans% de l’intervalle correspondant pour les échantillons témoins. le nombre de cellules documentées avant l’inscription à LSOCA était de cellules / μL pour les sujets témoins et les cellules / μL pour les patients P =, par test de Wilcoxon

Tableau Sujet Caractéristiques du participant n = Sujets de contrôle n = Patients atteints de CMV IRU n = P Caractéristique Moyenne Moyenne Nombre Pourcentage Nombre Pourcentage à l’indice visita Moyenne: Moyenne: & lt; années – années – années ≥ ans Race / ethnie Blanc Noir Hispanique Américain Indienne Autre Sexe Masculin Féminin Préalable Cidofovir prescription Oui Non Inconnu Nombre de cellules CD, cellules / μL Moyenne: Moyenne: & lt; – – & gt; Nombre de cellules CD, cellules nadir / μL Moyenne: Moyenne: Charge virale, une logcopie / mL Moyenne: Moyenne: & lt; – – & gt; Sujets témoins n = Patients atteints de CMV IRU n = P Caractéristiques Caractéristique Moyenne Moyenne Nombre Pourcentage Nombre Pourcentage à l’indice visita Moyenne: Moyenne: & lt; années – années – années ≥ ans Race / ethnie Blanc Noir Hispanique Américain Indienne Autre Sexe Masculin Féminin Préalable Cidofovir prescription Oui Non Inconnu Nombre de cellules CD, cellules / μL Moyenne: Moyenne: & lt; – – & gt; Nombre de cellules CD, cellules nadir / μL Moyenne: Moyenne: Charge virale, une logcopie / mL Moyenne: Moyenne: & lt; – – & gt; a Mesuré à l’index visitView Large

Les patients développant l’IRU du CMV ont de faibles réponses de lymphocytes T CD antiviraux au diagnostic

Nous avons évalué les réponses des lymphocytes T chez les patients et les sujets témoins lors de la visite d’index, lorsque les patients avaient une uvéite active. Nous avons émis l’hypothèse que les différences observées à ce moment pourraient suggérer si les réponses systémiques des lymphocytes T étaient liées à l’immunopathologie sous-jacente. Des échantillons évaluables d’un patient et au moins un sujet témoin à ce moment ont été évalués pour l’expression de IFN-γ, TNF-α ou IL- et pour la mobilisation de CDa après stimulation avec des pools de peptides CMV. données sur les combinaisons possibles d’expression de cytokines et de mobilisation de CDa pour les lymphocytes T CD et CD Les cellules exprimant ces combinaisons étaient extraordinairement rares dans l’ensemble des données et n’ont pas été analysées plus généralement <%; IL- seulement, IFN-γTNF-α-IL-CDa-, IFN-γ-TNF-α-IL-CDa, IFN-γTNF-α-IL-CDa, IFN-γTNF-α-IL-CDa et IFN -γ-TNF-αIL-CDaL'analyse des populations de cellules T CD restantes a démontré des réponses systématiquement plus faibles dans le groupe IRV du CMV La somme moyenne de ces réponses, par exemple, était% chez les sujets témoins et% parmi les patients P = par régression logistique conditionnelle; données non montrées; la somme moyenne des réponses mono- et bifonctionnelles était de% chez les sujets témoins et de% chez les patients P =; données non montrées Comme évalué par la production d'IFN-γ et de TNF-α dans les cellules bifonctionnelles, les réponses des lymphocytes T CD spécifiques de pp / IE étaient significativement plus faibles chez les patients avec CMU IRU que chez les sujets témoins. les réponses ont été évaluées en tant que fraction de lymphocytes T CD Figure A ou en nombre absolu de cellules circulantes Figure B La différence observée n'a pas été limitée à la production d'IFN-y et de TNF-a; des différences statistiquement significatives ont également été observées dans la fraction et / ou le nombre de cellules productrices de TNF-α et de CDa, d'IFN-γ seul ou de TNF-α seul Figures A et B, deuxième à quatrième panels

Figure Vue largeTélécharger slideCytomegalovirus CMV-spécifique des réponses des lymphocytes T chez les patients et les sujets témoins à la visite de l’index A, la fraction de cellules T CD spécifiques pp / IE chez les patients atteints de CMV immunité uvéite IRU ou témoins comme évalué par cytométrie de flux de cytokines CFC des aliquotes cellulaires de la visite d’index Les populations montrées n’exprimaient pas d’autres cytokines; par exemple, les cellules IFNTNF représentées sur la figure n’expriment pas IL- ou mobilisent CDa. Seules les séries de témoins ayant au moins le patient et le sujet témoin sont tracées, et seuls ces ensembles ont été analysés statistiquement. Les différents symboles montrés dans chaque dotplot sont indicatifs de ensembles; par exemple, les valeurs du Patient et des sujets témoins associés sont représentées par un cercle noir. Les valeurs P indiquées ont été calculées en utilisant Stata pour une régression logistique conditionnelle du statut IRV du CMV par rapport à la variable de réponse CFC montrée sur l’axe Y, en utilisant le contrôle case obésité. définir le nombre comme la variable de groupage B, le nombre absolu de cellules produisant les cytokines indiquées en réponse à la stimulation pp / IE, dans les cellules par microlitre C, Relation entre différentes mesures de la réponse des cellules T CD au virus, IFN-γ production et CDa mobilisation Les symboles utilisés pour le traçage sont identiques à ceux utilisés dans A et B, c’est-à-dire que tous les échantillons d’un ensemble cas-témoins spécifique sont représentés par un symbole partagé D, Relation entre une mesure de la réponse réponse cellulaireFigure View largeTélécharger la diapositiveCytomegalovirus Réponses des cellules T spécifiques du CMV chez les patients et les sujets témoins lors de la visite d’index A, La fraction de lymphocytes T CD spécifiques de pp / IE chez les patients w avec immunité contre le CMV uvéite IRU ou témoins comme évalué par cytométrie en flux cytokine CFC des aliquotes cellulaires de la visite d’index Les populations représentées n’expriment pas d’autres cytokines; par exemple, les cellules IFNTNF représentées sur la figure n’expriment pas IL- ou mobilisent CDa. Seules les séries de témoins ayant au moins le patient et le sujet témoin sont tracées, et seuls ces ensembles ont été analysés statistiquement. Les différents symboles montrés dans chaque dotplot sont indicatifs de ensembles; par exemple, les valeurs du Patient et des sujets témoins associés sont représentées par un cercle noir. Les valeurs P indiquées ont été calculées en utilisant Stata pour une régression logistique conditionnelle du statut IRV du CMV par rapport à la variable de réponse CFC montrée sur l’axe Y, en utilisant le contrôle case. définir le nombre comme la variable de groupage B, le nombre absolu de cellules produisant les cytokines indiquées en réponse à la stimulation pp / IE, dans les cellules par microlitre C, Relation entre différentes mesures de la réponse des cellules T CD au virus, IFN-γ production et CDa mobilisation Les symboles utilisés pour le traçage sont identiques à ceux utilisés dans A et B, c’est-à-dire que tous les échantillons d’un ensemble cas-témoins spécifique sont représentés par un symbole partagé D, Relation entre une mesure de la réponse réponse cellulaire Nous avons testé des modèles logistiques conditionnels variables pour déterminer si la production de différentes combinaisons de cytokines par les cellules T CD pourrait avoir des associations indépendantes avec la maladie CMV IRU Nous avons constaté que ces modèles n’étaient pas supérieurs aux modèles à variable unique, probablement en raison du petit nombre d’ensembles de cas-témoins évaluables n = et de la quasi-colinéarité des réponses des lymphocytes T CD déterminée en utilisant différentes combinaisons de cytokines. Une différence significative a été observée entre les patients et les sujets témoins pour toute population de cellules T CD Nous avons trouvé ce résultat surprenant, à la fois des données recueillies par d’autres personnes utilisant un échantillon vitré et de nos attentes Les réponses des lymphocytes T CD et CD à l’antigène CMV n’ont pas d’association statistiquement significative dans notre ensemble de données. Figure D De plus, les combinaisons d’expression des cytokines CD et CD T cytotoxiques spécifiques du CMV ne discriminent pas entre les patients et les patients. contrôler les sujets en utilisant les valeurs de coupure; Comme l’exposition antérieure au cidofovir, un médicament utilisé pour traiter le CMVR actif, peut provoquer une uvéite chronique en tant qu’effet médicamenteux indésirable, nous avons analysé notre ensemble de données lorsqu’il était restreint de deux manières. Figure: en éliminant les patients connus pour avoir reçu du cidofovir dans le passé, en laissant des ensembles de contrôle cas, ou en limitant les données à des patients connus pour certains de ne jamais avoir reçu le médicament Avec l’utilisation de l’une ou l’autre restriction, les différences entre les groupes cas et témoins restent significatives.

Figure View largeTélécharger slideCytomegalovirus Réponses des lymphocytes T spécifiques du CMV chez les patients et les sujets témoins non exposés au cidofovirA, Dotplots chez les patients qui n’ont pas reçu de cidofovir ou ne l’ont pas reçu n = et leurs sujets témoins respectifs De gauche à droite, le Les dotplots montrent la fraction de cellules fabriquant IFN-γ et TNF-α, la fraction formant TNF-α et mobilisant CDa, le nombre faisant IFN-γ et TNF-α, et le nombre faisant TNF-α et mobilisant CDa B, Dotplots pour patients connus pour ne pas avoir reçu de cidofovir n = Le graphique de gauche montre la fraction de cellules productrices d’IFN-γ et de TNF-α; Les réponses des lymphocytes T spécifiques du CMV chez les patients et les sujets témoins non exposés au cidofovirA, Dotplots pour les patients qui n’ont pas reçu de cidofovir ou ne l’ont pas reçu n = et leur sujets témoins respectifs De gauche à droite, les dotplots montrent la fraction de cellules productrices d’IFN-γ et de TNF-α, la fraction productrice de TNF-α et mobilisant CDa, le nombre d’IFN-γ et de TNF-α et le nombre de TNF -α et mobilisant CDa B, Dotplots pour les patients connus pour ne pas avoir reçu de cidofovir n = Le graphique de gauche montre la fraction de cellules produisant IFN-γ et TNF-α; le graphique à droite montre le nombre absolu de ces cellules

Modèles de réponse immunitaire prédictifs de l’IRU du CMV avant le diagnostic

Notre étude a également été conçue pour évaluer les réponses immunitaires avant le diagnostic de l’IRU, dans le but d’identifier les profils de réponse immunitaire pouvant être prédictifs du développement de la maladie. Des échantillons appariés provenant uniquement de groupes témoins ont été évalués dans cette analyse. Par exemple, les patients atteints d’IRU du CMV présentaient une fraction significativement plus faible et un nombre absolu de cellules synthétisant le TNF-α et le CDa mobilisant, par rapport aux sujets témoins qui n’ont pas développé la maladie. & lt; dans les deux cas, les réponses aux IFN-γ des panels médians A et B étaient également plus faibles chez les patients avec CMV IRU, bien que ces différences n’atteignent pas la signification statistique Figures A et B, panneaux gauche et droit

Figure Vue largeDownload slideCytomegalovirus Réponses des lymphocytes T spécifiques du CMV chez les patients et les sujets témoins lors de la visite pré-index A, Les dotplots montrent la fraction des lymphocytes T CD spécifiques pp / IE chez les patients atteints d’uvéite IRU ou de sujets témoins évalués par cytométrie de flux de cytokine CFC des aliquotes de cellules de la visite pré-index Symboles et statistiques sont comme décrit pour la figure B, Dotplots montrant le nombre absolu de cellules produisant les cytokines indiquées en réponse à pp / IE stimulation, en cellules par microlitreFigure View largeTélécharger A, Les dotplots montrent la fraction de lymphocytes T CD spécifiques de pp / IE chez des patients atteints d’uvéite IRV ou de sujets témoins, selon l’évaluation de la cytokine par le CMV immunisé contre le CMV. cytométrie en flux CFC des aliquotes de cellules à partir de la visite pré-index Les symboles et les statistiques sont tels que décrits pour la figure B, Dotplots montrant le nombre absolu de c les cellules produisant les cytokines indiquées en réponse à la stimulation pp / IE, dans des cellules par microlitreAs était vrai des échantillons recueillis lors de la visite d’index, aucune différence dans les réponses des cellules T CD n’a été observée entre les patients et les sujets témoins non montrés. Les patients exposés au cidofovir n’ont pas changé les conclusions tirées: les valeurs de P pour les populations cellulaires spécifiques au CMV montrées à la figure A étaient, et, respectivement,

Contrôle Treg Sur Les Cellules T Spécifiques Du CMV Et Non-Spécifiques Chez Les Patients Avec CMV IRU

Bien que nous ayons initialement spéculé que les patients avec CMV IRU pourraient avoir des cellules Treg moins ou moins fonctionnelles que les sujets témoins, les données recueillies en utilisant des tests CFC Figures – suggèrent la possibilité alternative – que les patients avec CMV IRU pourraient avoir des nombres excessifs ou une activité fonctionnelle de Treg Nous avons évalué le nombre de cellules Treg à l’index et les visites pré-index en tant que fraction de cellules T CD ou en nombre absolu. Trois phénotypes de cellules Treg ont été évalués CDCDlow, CDFOXP et CDCDlowFoxP Les données pour le premier phénotype sont présentées dans la figure A lors de la visite d’index et la figure B à la visite pré-index et ne montrent aucune différence entre les patients avec IRV CMV et les sujets témoins Les données recueillies en utilisant les différents phénotypes étaient fortement intercorrélés et ont donné des résultats qualitativement identiques, aucune différence entre les patients les données en termes de nombres de cellules circulantes absolues ont également montré aucune différence

Figure View largeTélécharger la diapositiveRégulation du nombre de cellules T et la fonction chez les patients atteints de cytomegalovirus CMV immunité de récupération uveite IRU et les sujets témoins A, la fraction de CDCDCDCDlow régulatrices T Treg cellules présentes chez les patients et les sujets témoins à la visite index Les symboles et statistiques sont comme décrit pour , La fraction des cellules TCD CDCDCDCDlow présentes chez les patients et les sujets témoins lors de la visite pré-index C, la suppression en pourcentage du panel CDleft et les réponses prolifératives du panel CDright à la stimulation avec un anticorps anti-CD lié à la surface. Ces dosages de suppression ont été réalisés en utilisant des échantillons de PBMC de cellules mononucléaires collectées après la visite d’index. Des aliquotes de cellules ont été testées intactes ou après épuisement de Treg, comme décrit dans Méthodes, et le pourcentage de suppression a été calculé en utilisant la formule suivante: Pourcentage de CFSE dans l’échantillon non appauvri / pourcentage de FC De gauche à droite, les cytogrammes de flux démontrent une faible prolifération dans l’échantillon non stimulé, une prolifération détectable dans l’échantillon intact traité avec l’anti-CD lié à la surface, plus robuste prolifération dans un échantillon appauvri en Treg, et suppression de la prolifération dans un échantillon auquel un nombre supraphysiologique de cellules Treg a été ajouté E, Dotplots montrant une suppression en pourcentage du panel CDleft et des réponses prolifératives du panel CDright à la stimulation avec des peptides pp / IEFigure Nombre et fonction chez les patients atteints de cytomegalovirus CMV immunité de récupération uveite IRU et les sujets témoins A, La fraction de CDCDCDCDlow régulatrices T Treg cellules présentes chez les patients et les sujets témoins à la visite de l’indice Les symboles et statistiques sont comme décrit pour la figure B, la fraction de CDCDCDCDlow Treg cellules présentes chez les patients et sujets témoins lors de la visite pré-index C Un plus grand nombre signifie plus de suppression et une plus grande fonction Treg Ces tests de suppression ont été effectués en utilisant des échantillons de PBMC de cellules mononucléaires du sang périphérique rassemblés après la visite de l’index. Aliquotes de cellules. Les pourcentages de suppression ont été calculés à l’aide de la formule suivante: Pourcentage de CFSEFlow en pourcentage d’échantillon appauvri CFSEFlow en échantillon non appauvri / pourcentage CFSEFlow en échantillon appauvri D, Exemple de tracés démontrant une suppression robuste dans un échantillon appauvri patient avec CMV IRU De gauche à droite, les cytogrammes en flux démontrent peu de prolifération dans l’échantillon non stimulé, prolifération détectable dans l’échantillon intact traité avec anti-CD lié à la surface, prolifération plus robuste dans un échantillon appauvri en Treg et suppression de la prolifération dans un échantillon auquel un nombre supraphysiologique de cellules Treg était Nous avons ensuite évalué la fonction des cellules Treg en utilisant des tests de prolifération pour tester l’impact de la déplétion des cellules Treg sur la prolifération des lymphocytes T chez les patients et les sujets témoins. des réponses polyclonales ont été évaluées en utilisant un anticorps anti-CD lié à la surface comme stimulus dans des puits contenant des populations cellulaires intactes ou des populations CDCDCDCD-déplétées. L’épuisement a été effectué en utilisant un tri cellulaire activé par fluorescence, afin d’éliminer toute possibilité de suppression. -Treg cellules qui étaient néanmoins CD Dans ce test, les patients et les sujets témoins présentaient une fonction cellulaire Treg équivalente Figure C Le degré de suppression observé était similaire à celui de la suppression que nous avons précédemment observé chez les personnes infectées par le VIH chronique, avec de nombreux individus, y compris les patients avec CMV IRU, ayant peu ou pas de suppression Figure C Seuls les patients de l’IRU du CMV qui ont été testés présentaient une suppression inhabituellement robuste, ce qui a été confirmé par des dosages de dosages pouvant être provoqués par des CDCDCDCDdécoulant des cellules non représentées. Figure DSuppression de T spécifiques au CMV Les réponses cellulaires ont été testées en utilisant des méthodes similaires, sauf que les peptides pp / IE ont été utilisés comme stimulus de prolifération. Dans ces tests, les patients et les sujets témoins présentaient également un degré de suppression similaire, de nombreux patients avec CMU IRU ne présentant aucune suppression détectable.

Les patients atteints d’IRU du CMV sont caractérisés par une diminution plus importante des cellules Th que les sujets témoins

Plusieurs études ont récemment démontré l’appauvrissement en cellules Th des primates non-humains infectés par le virus de l’immunodéficience simienne et des personnes infectées par le VIH, dont le degré est prédictif de la progression de la maladie Sur la base de ces résultats Les réponses des lymphocytes T spécifiques au CMV pourraient avoir un plus petit nombre de lymphocytes Th et de faibles réponses T antivirales associées. Nous avons constaté que les patients avec IRV du CMV lors de la visite d’index étaient en effet caractérisés par un plus petit nombre de lymphocytes Th que les sujets témoins. L’IRU du CMV avait également un rapport Th: Treg inférieur, une mesure qui a été utilisée par certains chercheurs pour suivre l’épuisement des cellules Th. Figure B Lors de la visite pré-index, dans un plus petit nombre d’échantillons évaluables, aucune des cellules ou le rapport des cellules Th: Treg a été observé des données non montrées La population de cellules Th n’était pas associée à des réponses de cellules T CD spécifiques CMV, contrairement à notre spéculation, mais était la ligne En outre, les cellules Th étaient positivement corrélées aux cellules Treg à la fois l’indice Figure D et pré-index Figure E visites

Figure Vue largeTéléchargement de la relation des cellules Th au cytomégalovirus CMV immunité de récupération uvéite Maladie de l’IRU, cellules T spécifiques au CMV, et régulatrices T Treg cellules A, Le nombre de cellules Th détectées chez les patients et les sujets témoins à la visite de l’index Les symboles et statistiques sont comme décrits pour la figure B, Dotplot montrant le rapport Th: Treg chez les patients et les sujets témoins à la visite de l’index Le ratio a été calculé en divisant la fraction de cellules Th parmi les cellules T CD par la fraction de cellules T CDCDCDCD Cellules Th, représentées sur l’axe X, et réponses spécifiques CMV parmi les cellules T CD, montrées sur l’axe Y La mesure montrée est une somme de la fraction de cellules trouvées pour produire IL- seul, TNF-α seul, les deux cytokines combinées , ou les deux cytokines en combinaison avec IFN-γ D, Relation entre les cellules Th et les cellules Treg lors de la visite de l’index E, Relation entre les cellules Th et les cellules Treg au pré-indice visitFigure View largeDownload slideRelationship of Cellules Th au cytomégalovirus CMV immunité de récupération uvéite Maladie de l’IRU, cellules T spécifiques du CMV, et les cellules régulatrices T Treg A, le nombre de cellules Th détectées chez les patients et les sujets témoins à la visite d’index Les symboles et statistiques sont comme décrit pour la figure B, Dotplot montrant le rapport Th: Treg chez les patients et les sujets témoins à la visite d’index Le ratio a été calculé en divisant la fraction de cellules Th parmi les cellules T CD par la fraction de cellules Treg CDCDCDCDlow parmi les cellules T CD, Relation entre cellules Th, montré sur l’axe X et les réponses spécifiques au CMV parmi les cellules T CD, montrées sur l’axe Y La mesure montrée est une somme de la fraction de cellules trouvées pour produire IL- seul, TNF-α seul, les deux cytokines combinées, ou les deux cytokines dans combinaison avec IFN-γ D, Relation entre les cellules Th et les cellules Treg lors de la visite d’index E, Relation entre les cellules Th et les cellules Treg aux cellules pré-index visitTh ont été identifiées en mesurant IL- production à partir de cellules T CD après stimulation par anti-CD et anti-CD, qui sont tous deux des stimuli polyclonaux Pour déterminer si la production d’IL chez les patients atteints d’IRU du CMV était attribuable à une perte généralisée de cellules productrices de cytokines, nous avons mesuré la capacité des cellules T CD à produire d’autres cytokines. IL-expression, il n’y avait pas de différence statistiquement significative dans la capacité des lymphocytes T CD de CMV IRU et des groupes témoins à produire IFN-γ, IL- ou TNF-α après stimulation avec des données anti-CD et anti-CD non montrées

DISCUSSION

Nous avons réalisé une étude cas-témoin pour tester l’hypothèse que le développement de l’IRU du CMV chez les patients immunorestérisés avec le SIDA est associé à un échec systémique du contrôle Treg sur les réponses immunitaires exagérées, reflétant une mauvaise reconstitution des cellules Treg. Les cellules Treg sont comparables chez les patients avec CMV IRU et les sujets témoins appariés, avant et après le développement de la maladie. En outre, les patients avec CMV IRU ont montré des réponses plus faibles de lymphocytes T CD anti-CMV que les sujets témoins et des réponses CD CD spécifiques au virus. , ainsi qu’une capacité équivalente à produire de l’IFN-γ, de l’IL- et du TNF-α après une stimulation polyclonale Ceci est en contraste avec le seul autre IRIS pour lequel la fonction des lymphocytes T avant et au moment du diagnostic IRIS a été étudiée. patients infectés atteints de tuberculose active évalués prospectivement lors de l’initiation de la thérapie antimycobactérienne et séquentiellement pendant HAART, une forte augmentation systémique de mon Des cellules productrices de Th IFN-γ spécifiques de l’antigène ont été observées chez des individus développant une tuberculose IRIS Nous n’avons pas observé d’explosion similaire dans les réponses systémiques spécifiques au CMV et aucune diminution du nombre de cellules Treg ou de la fonction chez les patients avec CMV IRU Une possibilité est que CMV IRU résulte d’une sensibilité accrue des hôtes lymphopéniques aux réponses des cellules T CD, comme cela a été observé dans un modèle animal de maladie de reconstitution immunitaire de Mycobacterium avium Différents mécanismes immunitaires peuvent sous-tendre la pathogenèse de différents syndromes IRIS. pathogène opportuniste et, peut-être, l’emplacement de la maladie Nous avons également constaté que les patients atteints d’IRU du CMV étaient différenciés des sujets témoins en ayant un plus petit nombre de cellules Th CD, qui ne sont pas spécifiques des antigènes CMV. virus de l’immunodéficience simienne et la maladie à VIH et que le degré d’appauvrissement est prédictif des progrès de la maladie Nous supposons qu’un nombre inférieur de cellules Th chez les patients atteints d’IRU du CMV peut refléter des pertes plus importantes tout au long de l’infection par le VIH et un niveau plus élevé de dysfonctionnement immunitaire. Cette affirmation est corroborée par le fait que les patients La numération des CD au nadir est inférieure à celle des sujets témoins, bien que le nombre de cellules CD au nadir ne soit pas significativement prédictif du développement du CMV IRU ou de la taille du compartiment Th aux données de visite d’index non montrées. quels nadirs de contrôle n’ont pas dépassé de manière significative les nadirs des cas & lt; Ces résultats indiquent que les faibles nadirs CD ne favorisent pas le développement du CMV IRU Bien que les réponses des lymphocytes T CD spécifiques du CMV ne soient ni prédictives ni associées au CMV IRU, d’autres chercheurs ont montré Au moins certaines de ces cellules sont présentes dans l’œil Peut-être que les réponses immunitaires PBMC aux antigènes CMV autres que pp et IE sont en corrélation avec le risque de CMV IRU Autres facteurs que nous n’avons pas examinés, tels que l’intervalle entre la thérapie anti-CMV et HAART ou la persistance de l’antigène CMV dans l’œil , pourrait également être important dans la pathogenèse du CMV IRUNéanmoins, nos données sont en accord avec d’autres rapports montrant qu’IRIS est associé à un faible nombre de CD au début du traitement antirétroviral. La déplétion cellulaire peut être soit une réflexion ou une cause de perte plus générale de cellules T CD, alors que la déplétion sévère des cellules Th est associée à la progression de la maladie. Le nombre et le nombre de cellules Th peuvent tous deux être des mesures de la sévérité de la maladie VIH avant l’initiation de la multithérapie. L’association de ces mesures avec le développement d’IRIS suggère que les syndromes IRIS sont enracinés dans les conditions immunitaires établies au CD nadir, plutôt que la défaillance du système immunitaire. pour rétablir les mécanismes immunorégulateurs après immunorestaurationNous remercions Joseph M McCune, MD, PhD, pour de nombreuses discussions utiles et pour son soutien de ce travail. Soutien financier Ce travail a été soutenu par le National Eye Institute RYY à MJ, Institut national des allergies et des maladies infectieuses AI à D H-O’C; PAI au Centre de Recherche sur le SIDA UCSF-GIVI, qui soutient le Laboratoire d’Immunologie de Base, et le Centre National de Ressources de Recherche UL RR à UCSF CTSIPotentiel de conflits d’intérêts Tous les auteurs: pas de conflits

Sylvie

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